【概要】

黄曲霉毒素是曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉的二次代谢产物，是自然界最危险的致癌物质之一，广泛存在于谷物、坚果、棉籽以及以此为原料生产的各种食品、油料、酒类、饲料中，并能通过动物体产生同样有害的代谢产物，存在于牛奶及奶制品，肉类甚至人体血液，组织中。

黄曲霉毒素中毒性最强的是黄曲霉毒素B1，是世界卫生组织规定的I类致癌物质，毒性是砒霜的68倍，其几乎一直和黄曲霉毒素B2、G1 和 G2共存，是肝癌的三大致病因素之首。世界大部分国家和地区都已对食品和饲料中的黄曲霉毒素最高允许水平作了规定，因此，准确测定食品及饲料中的黄曲霉毒素含量对于食品安全监控具有重要意义。

【适用范围】

可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、饲料等样本中的黄曲霉毒素B1。

【试验原理】

本试剂盒采用竞争ELISA原理，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本/黄曲霉毒素B1标准品溶液及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1与预包被在微孔板上的黄曲霉毒素B1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素B1的含量。

【试剂盒灵敏度】

   试剂盒灵敏度：0.5ppb

【交叉反应率】

   结构类似物                                                                交叉反应率

  黄曲霉毒素B1   ……………………………………………………………  100%

  黄曲霉毒素B2   ……………………………………………………………   15%

  黄曲霉毒素G1   ……………………………………………………………   11%

  黄曲霉毒素G2   ……………………………………………………………    4%

  黄曲霉毒素M1  ……………………………………………………………  0.5%

【试剂盒组成】

1. 96孔板×1块

2. 标准液×6瓶：（2ml/瓶）

    0ppb, 0.5ppb, 2ppb, 4ppb, 8ppb,16ppb

3. 酶标物1瓶   ……………………………………………6ml

4. 显色液1瓶   …………………………………………12ml

5. 终止液1瓶   …………………………………………10ml

6. 浓缩洗涤液 （10×）1瓶………………………… 50ml

7. 浓缩样品稀释液（10×）1瓶 ……………………50ml

【需要而未提供的设备及试剂】

设备：

┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm

┅┅振荡器（可选）

┅┅粉碎机

┅┅离心机（可选）

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：单道 20μl～200μl、200μl～1000μl、八道300μl

试剂：

┅┅甲醇（分析纯）

┅┅去离子水（或蒸馏水）

【试剂配制】

1. 样品稀释液：将浓缩样品稀释液用去离子水按1:9体积比进行稀释（1份浓缩样品稀释液+9份去离子水）。

2. 洗涤工作液：将浓缩洗涤液用去离子水按1:9体积比进行稀释（1份浓缩洗涤液+9份去离子水）。

3. 70%甲醇水：将甲醇用去离子水按70:30体积比进行稀释（7份无水甲醇+3份去离子水）。

【样本前处理步骤】

花生酱、芝麻酱、蛋黄酱、面粉、饼干、蛋糕等食品，各种饲料及花生粕、豆粕、麦麸、DDGS等原料（稀释倍数：5）

1. 取10g粉碎的样品与50ml 70%甲醇水混合均匀（可根据提取容器，等比例适量调整样品量和甲醇水的量）；

2. 高速均质2min或振荡提取5min；

3. 2000g离心5min或定性滤纸过滤；

4. 取100μl上清液待测。